Diseño de una técnica de amplificación isotérmica mediada por horquillas (LAMP) in-house para la detección de Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax
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Fecha
2018
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Editor
Universidad Nacional de Piura
Resumen
Se reportan cebadores de LAMP diseñados específicamente para el gen Pfr364, que se encuentra hasta en 41 copias en el genoma de P. falciparum; y también cebadores específicos para el gen Pvr47, presente en 14 copias en el genoma de P. vivax. Se utilizó el software MEGA 7 para alinear las secuencias de cada uno de los targets de amplificación extraídas de la base de datos del NCBI y, posteriormente, en el diseño de cebadores de LAMP se empleó PrimerExplorer V5. Las secuencias diseñadas fueron evaluadas con OligoAnalyzer para predecir la formación de estructuras secundarias y con PrimerBlast para ver la especificidad del cebador hacia el target. Consecutivamente, con estos cebadores se desarrolló con éxito un sistema LAMP colorimétrico para la detección de infecciones por P. falciparum y P. vivax en simultáneo, lo que supuso probar un nuevo método de visualización de resultados alternativo, aprovechando la caída de pH en la reacción de amplificación. Asimismo, utilizando ADN plasmídico se determinó el límite de detección del LAMP P. falciparum en 18.68 parásitos/μL y para P. vivax en 3.89 parásitos/μL, con un tiempo de incubación menor a una hora. Los resultados obtenidos sugieren que el sistema LAMP diseñado podría suponer una prueba diagnóstica simple y sensible para la detección de rutina de infecciones por P. falciparum y P. vivax asequible y fácil de manejar en entornos donde la ubicación e infraestructura no permite la implementación de métodos moleculares más sofisticados.
Descripción
Palabras clave
Plasmodium falciparum, Rojo neutro, LAMP, Malaria, Pfr364, Pvr47, Plasmodium vivax
Citación
APA